產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、肝臟組織勻漿中的 ALDH 蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于酒精代謝、肝損傷、醛類解毒及代謝性疾病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:大鼠乙醛脫氫酶(ALDH)elisa試劑盒
英文名稱:ALDH ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):CS-5275E
檢測(cè)原理:

大鼠乙醛脫氫酶 (ALDH) elisa 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過(guò)固相載體捕獲抗原,再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別,最后通過(guò)底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
?固相化?:微孔板預(yù)先包被抗大鼠 ALDH 抗體。
?結(jié)合?:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,ALDH 被固相抗體捕獲。
?檢測(cè)?:加入生物su化的抗大鼠 ALDH 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?:

?試劑準(zhǔn)備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?:每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍(lán)變黃)。
?檢測(cè)?:450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

1.平衡試劑:試劑盒室溫平衡 30 min,濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣:設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔,每孔加對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本,封板溫育。
3.溫育反應(yīng):37℃孵育 30–60 min,完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板:棄液甩干,洗滌液注滿每孔,浸泡后拍干,重復(fù)洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物:除空白孔外,每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體,封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板:同上述洗板流程,洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。
7.顯色:每孔先后加入 A、B 顯色液,避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù):加終止液終止反應(yīng),顏色由藍(lán)變黃;立即用酶標(biāo)儀在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,換算樣本待測(cè)指標(biāo)濃度。