產(chǎn)品簡介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠肝臟組織勻漿、腸道組織勻漿及細胞提取物中的細胞色素 P4503A4(CYP3A4)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于藥物代謝、肝藥酶研究、藥物相互作用及毒理學分析等領域。
產(chǎn)品名稱:大鼠細胞色素P4503E4elisa試劑盒
英文名稱:CYP3A4 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號:CS-5410E
檢測原理:

大鼠細胞色素 P4503A4 (CYP3A4) elisa 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標記的檢測抗體進行識別,最后通過底物顯色反應來定量檢測。
?固相化?:微孔板預先包被抗大鼠 CYP3A4 抗體。
?結(jié)合?:加入標準品或樣本,CYP3A4 被固相抗體捕獲。
?檢測?:加入生物su化的抗大鼠 CYP3A4 抗體和 HRP 標記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?:

?試劑準備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標準品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復5次。
?加檢測抗體?:每孔加入100μL檢測抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍變黃)。
?檢測?:450nm波長測定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

1.平衡試劑:試劑盒室溫平衡 30 min,濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣:設空白孔、標準品孔、樣品孔,每孔加對應標準品 / 稀釋后樣本,封板溫育。
3.溫育反應:37℃孵育 30–60 min,完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板:棄液甩干,洗滌液注滿每孔,浸泡后拍干,重復洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物:除空白孔外,每孔加入 HRP 標記抗體,封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板:同上述洗板流程,洗凈未結(jié)合游離酶標物。
7.顯色:每孔先后加入 A、B 顯色液,避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù):加終止液終止反應,顏色由藍變黃;立即用酶標儀在對應波長測定 OD 值。
9.結(jié)果計算:以標準品濃度、OD 值繪制標準曲線,換算樣本待測指標濃度。